摘要：狂犬病是一種致命的人畜共患病，全球每年約導致 59,000 人死亡，一旦病毒侵入中樞神經系統，死亡率幾乎高達 100%。本文將從狂犬病病毒的感染機制、臨床表現、流行病學特征以及當前的預防策略等方面進行詳細闡述，重點介紹狂犬病疫苗的發展現狀和未來趨勢，旨在為讀者提供全面且通俗易懂的狂犬病防控知識。一、認識狂犬病病毒（一）病毒的基本結構

狂犬病病毒屬于彈狀病毒科狂犬病毒屬，其形態呈子彈狀或棒狀，具有包膜。病毒的基因組為單鏈負義 RNA，長度在 11,615~11,966 個核苷酸之間。該基因組包含五個高度保守的基因，分別編碼核蛋白（N）、磷蛋白（P）、基質蛋白（M）、糖蛋白（G）和大結構蛋白（L）。其中，核蛋白包裹 RNA 形成核衣殼，具有螺旋對稱性；糖蛋白形成突起于包膜表面的 knob-like spikes，在病毒感染宿主細胞的過程中發揮關鍵作用；大結構蛋白 L 與磷蛋白 P 相互作用，形成 RNA 依賴的 RNA 聚合酶復合物，負責病毒的復制和轉錄（圖 1）。

（二）獨特的致病機制

狂犬病病毒的致病過程具有獨特性。病毒通過感染動物的咬傷、抓傷或舔舐破損皮膚、黏膜等途徑進入人體。病毒的糖蛋白 G 首先與宿主骨骼肌神經肌肉接頭處的煙堿型乙酰膽堿受體（nAChR）結合，隨后通過內吞途徑進入宿主細胞。在細胞內，低 pH 值觸發病毒包膜與宿主細胞膜融合，釋放病毒基因組進入細胞質。

病毒最初僅在骨骼肌或皮膚細胞中復制，隨后通過運動終板進入軸突，以每天 5~100 毫米的速度沿軸突逆行運輸，最終感染中樞神經系統（腦和脊髓）。從感染部位到中樞神經系統的傳播時間因咬傷部位與中樞神經系統的距離、患者免疫反應以及病毒數量等因素而異，通常為數天、一個月甚至更長時間。

在病毒復制過程中，磷蛋白 P 可作為干擾素拮抗劑，降低宿主的先天免疫反應，幫助病毒逃避免疫系統的攻擊。當病毒侵入中樞神經系統后，會迅速擴散，導致中樞神經元壞死和神經膠質細胞損傷，引發嚴重的生理和病理變化。此外，病毒還會從中樞神經系統擴散至其他器官，尤其是唾液腺，使得病毒能夠通過感染動物的唾液傳播給人類。

（三）臨床癥狀的發展階段

狂犬病的癥狀隨著疾病進展逐漸加重，主要可分為以下三個階段：

1. 潛伏期：通常為 1~3 個月，但也可能短至幾天或長達數年。潛伏期的長短取決于咬傷部位與大腦的距離、患者的免疫反應以及病毒的數量。

2. 前驅期：潛伏期過后，癥狀開始出現，包括發熱、疲勞、頭痛、受傷部位刺痛、麻木、灼燒感、不適、食欲不振，有時還會出現類似流感的癥狀，該階段持續 2~10 天。

3. 神經系統癥狀期（發作期）：進入發作期后，患者會出現神經系統癥狀，通常分為狂躁型和麻痹型。

• 狂躁型（約占 80% 的病例）：表現為極度煩躁、恐水（看到或聽到水流聲可引發抽搐）、恐風（對風或氣流過度敏感，甚至空氣流動也會引起疼痛）、無法吞咽、流涎過多、幻覺、過度興奮、攻擊性和異常行為。此階段可能持續數小時或數天，之后患者會進入興奮期而非持續的煩躁狀態。

• 麻痹型（約占 20% 的病例）：癥狀包括肌肉無力、逐漸麻痹（通常從咬傷部位開始），并逐漸陷入昏迷，最終死亡。麻痹型狂犬病患者相對安靜，癥狀進展緩慢，病程稍長，從咬傷肢體附近的刺痛或麻痹開始，向上延伸導致四肢癱瘓。

狂犬病病毒的宿主范圍廣泛，包括所有哺乳動物。常見的宿主有狗、貓等家養動物以及牛、馬、羊等牲畜；野生動物宿主包括蝙蝠、浣熊、狐貍、臭鼬和貓鼬等。

狂犬病的儲存宿主是指在特定區域內能夠維持和傳播病毒，且自身不會高頻率因感染而死亡的物種。蝙蝠是全球重要的儲存宿主，攜帶多種狂犬病病毒；在亞洲和非洲，狗是主要的儲存宿主，也是導致大多數人類狂犬病病例的原因；在北美、歐洲和澳大利亞，浣熊、臭鼬、狐貍和蝙蝠等野生動物是主要的儲存宿主；在拉丁美洲，蝙蝠（主要是普通吸血蝙蝠）和有時狐貍等野生食肉動物是主要儲存宿主。

狂犬病病毒的傳播媒介包括任何感染病毒的哺乳動物，主要傳播媒介有：

• 狗：是將狂犬病傳播給人類的主要媒介，占全球人類狂犬病死亡人數的 99% 以上。

• 家養動物：如 livestock 或貓，在罕見情況下也可傳播。

• 野生動物：包括蝙蝠、狐貍、浣熊和臭鼬等。

狂犬病主要通過狂犬病動物的咬傷或舔舐傳播，在亞洲、非洲和拉丁美洲的發展中國家廣泛流行，尤其是在狗群中狂犬病控制較差的地區。世界衛生組織（WHO）的數據顯示，亞洲和非洲占全球每年狂犬病死亡人數的 95% 以上。據估計，全球每年約有 59,000 人死于狂犬病，其中 90% 以上的病例是由狗咬傷引起的，大多數死亡發生在資源有限和疫苗短缺的地區。

目前，狂犬病毒屬可分為兩個進化群：進化群 I 包括狂犬病病毒、澳大利亞蝙蝠狂犬病毒、杜文海格病毒、歐洲蝙蝠狂犬病毒 1 型、歐洲蝙蝠狂犬病毒 2 型、阿拉萬病毒、胡占德病毒、科塔拉赫蒂蝙蝠狂犬病毒、博克勒蝙蝠狂犬病毒、伊爾庫特病毒、臺灣蝙蝠狂犬病毒和甘諾魯瓦蝙蝠狂犬病毒；進化群 II 包括莫科拉病毒、拉各斯蝙蝠病毒和希莫尼蝙蝠病毒。此外，西高加索蝙蝠病毒、伊科馬狂犬病毒和萊里達蝙蝠狂犬病毒不屬于這兩個進化群。這些病毒在神經嗜性、致病性、誘導細胞凋亡、免疫原性等方面存在差異。

疫苗接種是控制動物和人類狂犬病的有效策略之一。由于人類狂犬病主要由狗狂犬病引起，通過對狗進行疫苗接種和種群控制，有望減少人類狂犬病的發生。然而，目前控制蝙蝠傳播的狂犬病毒是一個復雜的挑戰，蝙蝠狂犬病對人類和動物健康的威脅日益增加。

二、動物狂犬病的預防（一）傳統疫苗

1. 滅活疫苗：通過物理或化學方法（如過氧化氫、二元乙基亞胺、乙基亞胺等）滅活病毒，保留病毒的免疫原性而不具有致病性。接種后，動物體內可產生特異性免疫反應，預防狂犬病病毒感染，歷史上廣泛應用于家養和伴侶動物。

2. 減毒活疫苗：是毒力降低的狂犬病病毒，不具有致病性但仍具有免疫原性，能在動物體內產生更有效且相對持久的免疫保護。通常用于控制野生動物中的狂犬病，但由于含有活病毒，使用時需要嚴格控制，以避免病毒恢復致病性。

3. 重組疫苗：利用基因工程技術，將狂犬病病毒的某些基因片段插入無害的載體中，使這些載體在動物體內產生類似于狂犬病病毒的免疫反應。具有免疫效果好、生產成本低、安全性高的優點，可避免疫苗引起疾病的風險。

（二）傳統疫苗面臨的挑戰

盡管狂犬病疫苗在動物中的有效性已得到充分證明，但全球動物疫苗接種率仍然不足，其實際保護效果也因一些限制因素而難以評估（表 2）。這些限制因素包括：

• 接種覆蓋率不足：由于交通、費用和接種不便等原因，尤其是在一些低收入和資源有限的國家，動物疫苗接種覆蓋率仍然較低。一些地區的經濟條件和公共衛生基礎設施限制了動物疫苗的普及，給動物狂犬病的預防和控制帶來巨大挑戰。

• 安全性問題：個別動物可能會出現超敏反應或不良反應。特別是減毒活疫苗可能會發生逆轉或自發突變，導致動物疾病，甚至造成環境污染。

• 長期有效性存疑：動物疫苗的長期效力和效價是一個問題，尤其是滅活疫苗。

• 誘導的抗病毒抵抗力存在差異：抗體的產生受多基因控制，狂犬病疫苗可能在高抗體應答者和低抗體應答者動物中誘導不同的抗病毒抵抗力。

• 口服抗性：在野外，不同宿主物種對狂犬病疫苗的攝取效率不同，且野外環境惡劣，動物胃腸道中富含蛋白酶，影響疫苗效果。

• 冷鏈要求：動物狂犬病疫苗的運輸和儲存需要維持冷鏈，這在偏遠地區尤其是沒有電力的地方非常困難。

1. 使用佐劑的滅活狂犬病疫苗

• 2023 年，Yu 等人使用 PIKA（一種與 Toll 樣受體 - 3（TLR-3）相互作用的穩定雙鏈 RNA）作為佐劑來增強狂犬病免疫。他們發現這種 PIKA 狂犬病疫苗在感染中國流行的七種狂犬病病毒株的小鼠中，無需免疫球蛋白即可顯示出超過 80% 的保護效力。與 licensed 狂犬病疫苗相比，PIKA 狂犬病疫苗在接種后僅 5 天就誘導出更多的中和抗體，并顯著增加了響應抗原產生 IFN-γ 的 T 細胞數量，同時注射部位的 IL-1β、IL-6、CCL-2 和 TNF-α 水平升高，血清中的趨化蛋白和促炎分子水平也升高。通過 TLR3 基因敲除小鼠的實驗進一步證實，PIKA 的作用依賴于 TLR3 途徑，表明 PIKA 狂犬病疫苗有可能成為一種非常有效的狂犬病疫苗。

• 2024 年，Sokol 等人評估了在小鼠中添加基于重組鼠傷寒沙門氏菌鞭毛蛋白的佐劑是否會增強滅活狂犬病疫苗的保護活性。他們使用一系列添加不同稀釋度佐劑的狗和貓用滅活干培養疫苗 “Rabikan”（Shchelkovo-51 株）進行動物研究，并以不含佐劑的類似系列滅活干培養疫苗作為對照。通過 NIH 效力試驗評估滅活狂犬病疫苗制劑的保護活性，結果顯示，與不含佐劑的疫苗（3.75 IU/mL）相比，與佐劑共同給藥的狂犬病疫苗的比活性值顯著更高（48.69 IU/mL），表明重組鞭毛蛋白有可能作為狂犬病疫苗成分中的有效佐劑。

• 2024 年，Zhou 等人開發了單針疫苗以減少免疫次數。他們首先設計了以狂犬病病毒 G 蛋白為抗原的疫苗，使用動態逐層薄膜作為可侵蝕涂層，作為時間控制釋放系統，實現 G 蛋白的多次脈沖釋放。結果發現，與相應的多劑量普通疫苗相比，單針疫苗誘導出更強的體液和細胞免疫反應。此外，他們還設計了第二種以香菇多糖為佐劑的單針疫苗，結果顯示，該單針疫苗也比相應的多劑量普通疫苗引發了更多的體液和細胞免疫反應，且由于香菇多糖能夠增強免疫反應，第二種單針疫苗在抑制狂犬病病毒方面比第一種更有效。

口服減毒狂犬病疫苗

• 2023 年，Megawati 等人評估了在印度尼西亞巴厘島給當地狗口服第三代減毒活狂犬病疫苗（病毒株 SPBN GASGAS）后的免疫原性。研究人員給狗直接口服狂犬病疫苗或提供含有疫苗小袋的雞蛋味誘餌，并將其體液免疫反應與另外兩組狗進行比較：一組接受腸外滅活狂犬病疫苗，另一組為未接種的對照組。在接種前和接種后 27~32 天分別對這些狗進行采血，并檢測血樣中是否存在病毒結合抗體。結果發現，三組接種狗的血清轉化率相似：誘餌組為 88.9%；直接口服組為 94.1%；腸外組為 90.9%；對照組為 0%。口服和腸外接種狗之間的抗體水平沒有顯著差異，表明在野外條件下，這種第三代減毒活狂犬病疫苗與腸外疫苗相比能夠引發足夠的免疫反應，證明口服狂犬病疫苗有可能成為大規模狗疫苗接種計劃中針對難以接觸的流浪狗的重要工具。

基于 mRNA 的狂犬病疫苗

• 2022 年，Li 等人使用優化的表達 RABV-G 的 mRNA 疫苗構建體（LVRNA001），并在小鼠和狗中評估其免疫原性和保護能力。他們發現 LVRNA001 在小鼠中誘導中和抗體產生和強烈的 Th1 細胞免疫反應，并證明 LVRNA001 在小鼠和狗中均能提供針對 50 倍半數致死量（LD50）狂犬病病毒攻擊的保護。保護效力試驗表明，在小鼠中，給藥間隔（14 天）比 3 天或 7 天的間隔誘導更多的抗體。最后，他們評估了接受兩劑 25 μg LVRNA001 的狗在暴露后免疫預防狂犬病病毒的存活率，并與三個月內接受五劑滅活疫苗的狗進行比較，結果顯示 LVRNA001 組的存活率（100%）顯著高于滅活疫苗對照組（33.33%），表明 mRNA 疫苗可以為狂犬病提供新的預防策略。

• 2023 年，Hellgren 等人使用兩劑脂質納米粒配制的未修飾 mRNA 疫苗，編碼狂犬病病毒糖蛋白 G（RABV-G），在非人靈長類動物的血液中誘導 RABV-G 特異性漿母細胞和 T 細胞，以及骨髓中的漿細胞。與兩劑 licensed 狂犬病疫苗 Rabipur? 相比，動物體內 RABV-G 特異性漿母細胞和 T 細胞的水平更高。此外，mRNA 疫苗產生的 RABV-G 結合和中和抗體滴度均高于 Rabipur?，盡管 mRNA 和 Rabipur? 疫苗的反應的體細胞超突變程度和克隆多樣性相似。mRNA 疫苗誘導的更高總體抗體滴度可以提高相關狂犬病毒株的交叉中和能力，表明 mRNA 有希望成為開發針對狂犬病病毒的廣泛保護性疫苗的平臺。

狂犬病一旦病毒侵入中樞神經系統幾乎是致命的，因此預防病毒感染至關重要。以前，最常用的人類狂犬病疫苗是滅活疫苗，如果感染者在暴露后及時接種狂犬病疫苗，可以預防 99% 的死亡。主要有兩種疫苗接種策略：暴露前預防和暴露后預防。

暴露前接種可以保護狗等家養動物和其他寵物免受狂犬病病毒感染，從而降低人類感染的風險，也建議經常接觸動物的人（如獸醫、動物救援人員或野外工作者）以及生活在難以到達且遠離衛生中心、與蝙蝠種群密切接觸的地區（如亞馬遜地區的國家）的人進行暴露前接種。而暴露后接種是普通人的重點策略，建議被狂犬病動物咬傷或抓傷的人接種。傷口應立即清洗，然后接種狂犬病疫苗。目前，高度懷疑狂犬病的患者需要及時注射暴露后免疫球蛋白和疫苗，以防止病毒進入中樞神經系統。

目前廣泛用于人類和動物暴露后預防狂犬病的疫苗或免疫球蛋白主要分為三種類型（表 3）：

• 細胞培養疫苗（CCV）：包括人二倍體細胞培養狂犬病疫苗（HDCV）、倉鼠腎細胞疫苗（HKCV）、Vero 細胞疫苗和純化雞胚細胞培養狂犬病疫苗（PCECV），均能賦予針對狂犬病病毒感染的保護性免疫力。

• 抗狂犬病血清：是含有中和狂犬病病毒特異性免疫球蛋白的制劑，在感染狂犬病病毒后與疫苗聯合使用，尤其是用于嚴重暴露如深咬傷且從未接受過抗血清和疫苗的患者。

• 狂犬病免疫球蛋白：用于被狂犬病動物暴露的人作為暴露后預防，僅用于從未接種過狂犬病疫苗的人，提供直接的抗體保護，用于暴露后緊急情況，促進患者在體內產生自身抗體之前得到有效保護。

疫苗接種是控制狂犬病的好方法，但也面臨一些挑戰，如不同疫苗類型的安全性、免疫原性、暴露后預防的經濟障礙以及教育和全面意識的有限。此外，冷鏈要求可能是狂犬病疫苗使用的障礙。

人類狂犬病疫苗廣泛用于預防狂犬病病毒感染，但也存在一些影響甚至阻礙疫苗推廣和分發的缺點，包括免疫反應不完全、副作用、需要多次接種、費用高、疫苗供應不足和冷鏈要求（表 4）。

（三）新型人類狂犬病疫苗的發展

盡管人類狂犬病疫苗已使用多年，但在特定情況下，疫苗接種仍無法保護一些感染患者。在一些資源有限的地區，疫苗的分發和推廣仍然困難。因此，需要開發新的疫苗來改善延遲的抗體反應和較弱的細胞免疫，以提供全面保護，同時降低成本并提高接種的便利性。最近，更有效、更安全、更耐熱和更便宜的人類狂犬病疫苗已被開發或正在開發中。

1.基于 Vero 細胞的狂犬病疫苗

• Vero 細胞（綠猴腎細胞）是一種連續非整倍體細胞系，具有許多分裂周期而不衰老的特點。與其他哺乳動物細胞不同，Vero 細胞在感染病毒時不分泌干擾素 α/β，因為其干擾素分泌基因存在缺陷，但它們仍然具有干擾素 α/β 受體（IFNARs），并且在向培養基中添加干擾素時可以做出反應。Vero 細胞不含動物或人類成分，殘留 DNA 含量低，因此被廣泛用于病毒感染分子機制的研究和疫苗生產，如純化 Vero 細胞培養凍干狂犬病疫苗（PVRV）。

• 2022 年，Quiambao 等人在 Vero 細胞中開發了一種狂犬病疫苗候選株（PVRV-NG），并在暴露前方案中與 licensed 人二倍體細胞培養狂犬病疫苗（HDCV）進行了比較。在菲律賓的一項 II 期隨機臨床研究中，將 2~11 歲的健康兒童和 12~17 歲的青少年按 2:1 的比例隨機分配接受三劑 PVRV-NG 或 HDCV，分別在第 0、7 和 28 天注射。在第一次接種后第 0、42 天和 6 個月測量狂犬病病毒中和抗體，并在接種期間和最后一次注射后 28 天內評估安全性，此外還監測嚴重不良事件直至最后一次接種后 6 個月。結果發現，兩組的 342 名參與者（包括 171 名兒童和 171 名青少年）在第 42 天的狂犬病病毒中和抗體（RVNA）滴度均≥0.5 IU/mL，且超過 90% 的參與者在第 42 天和第 6 個月時 RVNA 滴度仍≥0.5 IU/mL。這一結果表明，PVRV-NG 和 HDCV 的血清轉化率相似，每次接種后及最后一劑接種后 6 個月內，兩組的不良反應類型和嚴重程度相似。該研究表明，在暴露前環境中，PVRV-NG 的免疫譜與 HDCV 幾乎相同，且耐受性良好，無安全問題，說明 PVRV-NG 有望成為一種良好的人類狂犬病疫苗。

• 2023 年，Pichon 等人在 Vero 細胞中開發了狂犬病疫苗候選株（PVRV-NG），并將其重新配方為 PVRV-NG2。他們在五項多中心、觀察者盲法的 II 期試驗中評估了 PVRV-NG，并研究了三種不同劑量（抗原含量）的 PVRV-NG2 與 HDCV（Imovax Rabies?）的安全性和免疫反應。在該試驗中，健康成人（N=320）按照 2:2:2:1:1 的比例隨機接受 PVRV-NG2（低、中或高劑量）、PVRV-NG 或 HDCV，按照第 0、3、7、14 和 28 天的五劑暴露后方案進行肌肉注射；此外，所有參與者在第 0 天接受人類狂犬病免疫球蛋白肌肉注射。在 0、14、28、42 天和 6 個月后，評估其免疫原性，并計算中和抗體滴度≥0.5 IU/mL 的參與者比例。結果顯示，幾何平均滴度隨抗原含量在每個時間點增加。對于 PVRV-NG2 的幾何平均滴度，高劑量最高；然而，中劑量與 HDCV 相似，且該劑量與 PVRV-NG 相似。在安全性方面，PVRV-NG2 與 PVRV-NG 相似，但 PVRV-NG2 或 PVRV-NG（36.7–47.5%）的注射部位反應少于 HDCV（61.5%）。該研究表明，高劑量 PVRV-NG2 的免疫原性和安全性概況可作為比當前 HDCV 疫苗更好的暴露后預防疫苗。

• 2023 年，Huang 等人開發了一種基于 Vero 細胞的狂犬病疫苗（PVRV-WIBP），并評估了其用于人類的安全性和免疫原性。在 III 期臨床試驗中，招募了 40 名第 1 階段參與者和 1956 名第 2 階段年齡在 10 至 50 歲的受試者。為了評估安全性，第 1 階段的 20 名參與者接受了四劑或五劑方案的 PVRV-WIBP。在第 2 階段，1956 名受試者被隨機分為三組，分別接受五劑 PVRV-WIBP、五劑 PVRV-LNCD 和四劑 PVRV-WIBP。他們在接種后第 7 或 14 天和第 35 或 42 天測量了針對狂犬病的血清中和抗體滴度，并記錄了超過 6 個月的不良事件。在 PVRV-WIBP（4 劑和 5 劑）和 PVRV-LNCD 組中，發現大多數不良反應是輕度的，甚至中度反應在每次注射后 1 周內即可緩解。結果顯示，所有三組在初始劑量后 14 天均完全血清轉化。與 PVRV-LNCD 組相比，PVRV-WIBP 組（四劑或五劑）的易感受試者在完成完整接種計劃后 14 天顯示出更高的針對狂犬病病毒的中和抗體滴度。PVRV-WIBP 在 10–50 歲的健康個體中誘導的免疫反應與 PVRV-LNCD 幾乎相同，且耐受性良好。該研究表明，PVRV-WIBP（四劑和五劑方案）可作為暴露后預防的替代狂犬病疫苗。

2.基于 Vero 細胞的狂犬病疫苗與人類狂犬病免疫球蛋白聯合用于暴露后預防

• WHO 建議對 III 類嚴重狂犬病暴露進行廣泛的傷口清洗、立即接種疫苗和注射人類血液來源的狂犬病免疫球蛋白（HRIG）作為暴露后預防。美國疾病控制與預防中心（CDC）也建議狂犬病暴露后預防包括傷口清洗、人類狂犬病免疫球蛋白（HRIG）和四劑系列疫苗。HRIG 僅在暴露后開始時給予一次，且僅給予以前未接種過疫苗的人。HRIG 可提供即時的抗體保護，直到患者能夠主動產生自己的抗體，但一些研究表明，HRIG 可能在一定程度上干擾狂犬病疫苗的免疫原性。盡管如此，PVRV-NG 與 HRIG 的聯合治療在一些動物研究和臨床試驗中已顯示出前景。

• 2022 年，Bernard 等人在倉鼠模型中研究了 HRIG 對基于 Vero 細胞的下一代狂犬病疫苗候選株（PVRV-NG）的干擾，并與標準護理疫苗進行了比較。他們通過四劑暴露后預防方案評估了人類或馬源 HRIG 對 PVRV-NG、Verorab? 和 Imovax? Rabies（HDCV）誘導的免疫反應的干擾。對于使用或不使用 HRIG 的疫苗，他們還分別測定了針對狂犬病的血清中和抗體滴度和特異性血清 IgM 滴度。他們暫時發現 HRIG 對 PVRV-NG 的干擾與 PVRV 相似，且在第 7 天傾向于低于 HDCV。結果顯示，在倉鼠中，HRIG 對 PVRV-NG 的干擾與標準護理疫苗相似或更低。該研究表明，基于 Vero 細胞的 PVRV-NG 與 HRIG 聯合治療有望用于人類狂犬病的暴露后預防。

• 2024 年，Pineda-Pe?a 等人使用與 licensed PVRV（Verorab?）和 HDCV（Imovax Rabies?）相同的 Pitman–Moore 株開發了下一代狂犬病疫苗（PVRV-NG2）。他們評估了 PVRV-NG2 在有和沒有 HRIG 肌肉注射情況下的免疫原性和安全性，并與 PVRV+HRIG 和 HDCV+HRIG 在類似的暴露后預防模型中進行了比較。在雙中心、改良、雙盲 II 期研究中，將 > 18 歲的健康成人（N=640）按 3:1:1:1 的比例隨機分配至 PVRV-NG2+HRIG、PVRV+HRIG、HDCV+HRIG 或單獨 PVRV-NG2 組，并在第 0、3、7、14 和 28 天作為單一疫苗接種，適用組在第 0 天接種 HRIG。他們在接種后第 0、14、28 和 42 天測定 RVNA 滴度。所有參與者均達到狂犬病病毒中和抗體（RVNA）滴度≥0.5 IU/mL（主要目標），以顯示 PVRV-NG2+HRIG 與 PVRV+HRIG 和 HDCV+HRIG 相比的非劣效性。他們還評估了最后一次注射后 6 個月內的不良事件。結果顯示，幾乎所有參與者（99.6%，PVRV-NG2+HRIG；100%，PVRV+HRIG；98.7%，HDCV+HRIG；100%，單獨 PVRV-NG2）在第 28 天達到 RVNA 滴度≥0.5 IU/mL，且各組在所有時間點的幾何平均滴度相似。此外，疫苗的安全性概況在 PVRV-NG2 與其他組之間相似。該研究表明，PVRV-NG2+HRIG 的免疫原性和安全性與當前標準護理狂犬病疫苗用于暴露后預防幾乎相同，因此 PVRV-NG2+HRIG 有望成為人類狂犬病的聯合治療方案。
  

3.含佐劑的狂犬病疫苗用于暴露后預防

• 2023 年，Yu 等人使用 PIKA（一種化學穩定的雙鏈（ds）RNA 類似物，可與 Toll 樣受體 3（TLR3）相互作用）作為滅活純化狂犬病病毒疫苗的佐劑，以促進免疫反應。在動物研究中，他們測試了中國流行的七種狂犬病病毒株。結果表明，PIKA 狂犬病疫苗在小鼠中無需使用免疫球蛋白即可具有超過 80% 的保護效力。PIKA 狂犬病疫苗顯示，接種后 5 天內中和抗體水平顯著提高，表明比 licensed 狂犬病疫苗誘導了更多的免疫反應。他們發現，PIKA 狂犬病疫苗導致響應抗原產生 IFN-γ 的 T 細胞顯著增加。此外，注射 PIKA 狂犬病疫苗后，注射部位的 IL-1β、IL-6、CCL-2 和 TNF-α 水平均升高，結果還表明血清中的趨化蛋白和促炎分子水平增加。通過 TLR3 基因敲除小鼠的試驗進一步證實了 PIKA 的作用模式，驗證了其功能依賴于 TLR3 途徑。該研究表明，PIKA 有潛力作為佐劑，在不使用 HRIG 的情況下顯著提高狂犬病疫苗的效力。

4.單克隆抗體組合用于暴露后預防

• 用于人類狂犬病暴露后預防的被動免疫使用免疫球蛋白，無論是人類單克隆抗體（mAb）還是 HRIG。目前，建議用新興的 mAb 或 mAb 組合替代傳統的 HRIG，因為 HRIG 供應有限且存在潛在的安全風險。

• 2024 年，Long 等人通過混合兩種非競爭性、非重疊的人類單克隆抗體 RM02 和 RM05（質量比 1:1）開發了一種單克隆抗體組合 CRM25。他們發現 CRM25 可以交叉中和狂犬病病毒株，并對所有測試的常見狂犬病病毒和非狂犬病病毒進化群 I 狂犬病毒的感染表現出抑制作用。結果顯示，與 HRIG 相比，CRM25 可以保護敘利亞金黃倉鼠免受致命的狂犬病病毒攻擊。該研究表明，CRM25 可能成為未來臨床試驗中狂犬病暴露后預防的潛在治療候選藥物。

四、討論與未來展望

狂犬病主要通過動物咬傷（尤其是狗）傳播，因此動物的暴露前預防至關重要。由于人類不是狂犬病的傳播媒介，除了器官移植的情況外，人類僅需職業風險人群進行暴露前預防，而暴露后預防對人類狂犬病的預防至關重要。動物疫苗的開發應側重于暴露前預防，而人類狂犬病疫苗的開發則側重于暴露后預防的臨床應用。為實現 WHO 到 2030 年根除狂犬病的目標，需突出新型狂犬病/狂犬病毒疫苗的發展和優勢。

傳統動物疫苗面臨的挑戰，包括接種覆蓋率不足、安全性問題、長期有效性存疑和抵抗力差異等，可能成為動物狂犬病防控推廣的障礙。幸運的是，一些新型疫苗候選株有望克服這些限制：例如，使用佐劑的滅活疫苗相對安全且能增強效力；口服減毒疫苗可擴大接種覆蓋率；基于 mRNA 的疫苗有可能提供安全、有效且抵抗力較低的疫苗。因此，口服給藥的 mRNA 疫苗可被視為未來潛在的動物狂犬病疫苗，盡管冷鏈要求仍然是一個關鍵問題，尤其是對于野生動物。

當前的人類狂犬病疫苗通常被視為病原體的治療性疫苗，因為它們通常用于暴露后針對狂犬病病毒的免疫接種。暴露于狂犬病動物后及時治療至關重要，因為狂犬病疫苗對已出現臨床癥狀的病毒感染無效，尤其是在病毒侵入中樞神經系統后。當前的人類狂犬病疫苗（如 HDCV、HKCV、PCECV）存在一些缺點，包括免疫反應不完全、副作用、需要多次接種和費用高。因此，PVRV 已成為增強效力和安全性并降低費用的疫苗開發合適對象。Vero 細胞的優點包括許多分裂周期而不衰老、不含動物或人類成分、殘留 DNA 含量低，此外，Vero 細胞易于在培養基中低成本培養，可純化和凍干用于狂犬病疫苗的生產。為了增強效力，可能需要 PVRV 與 HRIG 的組合。然而，HRIG 通常難以獲取且昂貴，在一些研究中甚至可能在一定程度上干擾狂犬病疫苗的免疫原性。與 HRIG 相比，佐劑（如 PIKA）和單克隆抗體更容易獲取、便宜且安全。因此，添加佐劑或單克隆抗體組合可能是無需使用 HRIG 的狂犬病疫苗的替代選擇。

除了 PVRV，基于 mRNA 的疫苗是另一種有前途的人類狂犬病疫苗候選株，盡管需要更多證據來證明其在臨床試驗中的安全性和有效性。基于 mRNA 的疫苗具有以下幾個顯著優點：（1）安全且抵抗力較低，因為僅使用病毒遺傳物質的一小部分；（2）劑量率低；（3）狂犬病病毒逆轉的可能性最低；（4）插入突變的風險低；（5）效力高；（6）開發周期加快；（7）潛在的低成本生產。此外，在一些動物研究中，基于 mRNA 的疫苗已被證明可有效誘導針對狂犬病的細胞免疫和體液免疫。

當前用于人類的 mRNA 疫苗主要通過肌肉或皮下注射給藥。為了減少疼痛、壓力、成本和接種的專業要求，非侵入性途徑（包括口服和氣霧劑遞送，如鼻內和口服吸入）正成為動物疫苗的首選途徑。因此，需要設計新的載體來提高這些非侵入性給藥途徑的 mRNA 疫苗的效力和穩定性。科學家必須評估天然動物中 mRNA 疫苗引起的不良事件和過敏反應。此外，需要開發安全有效的遞送工具（如納米顆粒、病毒、病毒樣顆粒）來保護 mRNA 疫苗在動物體內免受消化和變性。目前，由于需要昂貴的遞送工具和冷鏈，mRNA 疫苗的費用仍然很高。如果未來能夠以低成本和高質量開發 mRNA 疫苗，這對人類和動物狂犬病的預防將極為重要。

識別微信二維碼，添加生物制品圈小編，符合條件者即可加入

生物制品微信群！

請注明：姓名+研究方向！

本公眾號所有轉載文章系出于傳遞更多信息之目的，且明確注明來源和作者，不希望被轉載的媒體或個人可與我們聯系(cbplib@163.com)，我們將立即進行刪除處理。所有文章僅代表作者觀點，不代表本站立場。