摘要：抗體 - 藥物偶聯(lián)物（ ADC ）在研究和上市治療各種癌癥和其他疾病方面越來越普遍。大多數(shù) ADCs 由小分子成分（藥物接頭）化學偶聯(lián)的單克隆抗體的結構，以及這種雜交結構為化學、制造和控制（ CMC ）開發(fā)帶來了許多挑戰(zhàn)。一項基準調查的結果，所有參與調查的公司都使用超濾 / 滲濾（ UF/DF ）在偶聯(lián)步驟和分離關鍵操作后純化 ADC ，以控制 ADC 藥物中的小分子雜質。本文展示了結果和分析來受訪公司關于 UF/DF 后共軛純化 ADC 的應用。本文對實際考慮進行了深入分析，如常用操作參數(shù)、去除不同類型雜質的相對效率、技術挑戰(zhàn)和新興技術的應用。此外，在為新的 ADC 開發(fā) UF/DF 工藝時，建議在何處開始提供。總體目標是提供當前行業(yè)實踐的概述，用于 UF/DF 純化 ADC 并促進該領域的進一步交流和創(chuàng)新。

【NO.1】介紹

抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）已成為現(xiàn)代抗癌療法工具箱的重要組成部分。基于數(shù)十年的基礎研究，這些研究導致了成功的開發(fā)項目，過去幾年在該領域實現(xiàn)了高水平的增長，并且ADC在臨床和市場上越來越成熟。大多數(shù)腫瘤學ADC的結構包括一個單克隆抗體（mAb），該單克隆抗體（mAb）附加了許多細胞毒性小分子（“藥物”或“有效載荷”），這些小分子通過化學接頭連接（圖1）。這種雜交結構體現(xiàn)了其生物和小分子成分的最佳屬性：mAb能夠選擇性地結合腫瘤細胞表面過表達的抗原，隨后內化到細胞中，此時，高效細胞毒素可以釋放以發(fā)揮其腫瘤殺傷作用。因此，ADC能夠靶向遞送化療藥物，改善分子的治療窗口（以及因此的臨床結果），否則這些分子會對全身給藥產(chǎn)生毒性。

圖1.抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）結構的高級表示

ADC的開發(fā)也帶來了重大的技術和戰(zhàn)略復雜性，特別是在化學、制造和控制（CMC）方面。在此重點關注藥物接頭組分和隨后的偶聯(lián)/純化。其目標是對當前的行業(yè)實踐進行基準測試，確定趨勢和差距，并為藥物連接劑和ADC的CMC開發(fā)提出基于科學的創(chuàng)新方法。

一個關鍵關注領域是定義由藥物接頭的化學合成和隨后與mAb的偶聯(lián)反應產(chǎn)生的小分子雜質的控制策略原則，因為現(xiàn)有的小分子和生物藥物監(jiān)管指南中沒有明確涵蓋ADC的這一主題。在偶聯(lián)步驟后，通常使用多少操次作以及哪種類型來純化粗ADC。所有參與調查的公司表示使用超濾/滲濾（UF/DF），對于大多數(shù)公司（73%）來說，這是唯一采用的純化方法。對于使用兩次純化操作的少數(shù)公司（27%），除了UF/DF之外，還使用了各種制備色譜方法中的一種（疏水相互作用（HIC）、離子交換（IEX）或體積排阻（SEC））。

從這些數(shù)據(jù)中得出的結論是，UF/DF既是普遍應用的，也是ADC整體雜質控制策略的關鍵組成部分。本文深入探討了UF/DF在ADC偶聯(lián)后純化中的應用。目的是更廣泛地了解UF/DF在ADC加工中如何實際大規(guī)模執(zhí)行；討論其用于偶聯(lián)后純化的優(yōu)勢、挑戰(zhàn)和局限性；并突出潛在的未來方向。

1.1 UF/DF在生物制藥加工中的應用及其在ADC工藝中應用的關鍵考慮因素

在生物制藥行業(yè)，UF/DF是mAb下游加工中常用的單元操作。mAb生產(chǎn)的典型工藝包括大約10個步驟，結合了上游和下游操作，從生物反應器到幾個層析和中間/最終過濾步驟。UF/DF通常放置在精純色譜步驟之后的工藝接近尾聲。它包括初始濃縮（超濾，通常稱為UF）以將進料濃縮至目標洗濾濃度，然后以恒定體積進行洗濾（DF）步驟，以便將緩沖液交換為最終緩沖液成分。最后（可選）步驟是最后的UF步驟，在該步驟中，在配制之前將產(chǎn)品進一步濃縮至最終目標濃度。UF/DF作在切向流過濾（TFF）模式下運行，其中蛋白質溶液平行于膜表面流動。這種流向允許膜表面被主動掃掠，從而最大限度地降低發(fā)生膜污染和濃度極化現(xiàn)象的風險。含有沉淀和滲濾產(chǎn)物的溶液保留在進料/截留物再循環(huán)罐中，而含有多余體積的緩沖液在滲透液中去除。截留分子量（MWCO）膜經(jīng)過精心選擇，目標產(chǎn)物與膜孔徑的典型比例為5：1（即，典型的mAb分子量為～150kDa，UF/DF膜孔徑為30kDa）。

與單獨生產(chǎn)mAb或小分子原料藥（DS）相比，ADC工藝要復雜得多。首先，mAb和藥物接頭需要分別制備為中間體，然后將它們偶聯(lián)在一起以生成粗ADC。根據(jù)偶聯(lián)化學性質，除了實際的偶聯(lián)步驟外，還可能涉及多個單元操作，包括（如方案1所示）在引入藥物接頭之前激活mAb，以及在反應結束時淬滅過量的藥物接頭。然后將得到的粗ADC進行后偶聯(lián)純化步驟，包括UF/DF操作，這是本文的重點。在每個階段，都需要建立適當?shù)倪^程控制和分析方法。

方案1.ADC DS生產(chǎn)的代表性工藝流程圖

雖然mAb的UF/DF的一些一般原則可以應用于ADC，但后者存在許多差異和挑戰(zhàn)（表1）

表1.mAb和ADC在蛋白質結構以及UF/DF在各自過程中的重要性和作用方面的差異

mAb的純化技術到現(xiàn)在已經(jīng)有了成熟的單元操作和關于雜質清除方法。相比之下，目前關于ADC純化的文獻較少，詳細介紹UF/DF在偶聯(lián)后純化中應用的文獻相對較少。Liao及其同事在抗體溶液的模型系統(tǒng)中證明了UF/DF有效清除了幾種小分子試劑和溶劑。藥物接頭相關物種的清除對每個ADC程序都是特異性的，不包括在他們的研究范圍內。在臨床前ADC候選藥物的早期工藝開發(fā)過程中，Mendelsohn及其同事報告了一種克級ADC合成，其中使用UF/DF高效清除了小分子雜質。Nadkarni及其同事評估了UF/DF從另一個ADC中去除未偶聯(lián)的藥物接頭。然而，在本案中，母體藥物接頭不能被完全去除；因此，在UF/DF之前添加了硫醇基淬滅劑以將其轉化為更親水性的衍生物。觀察到藥物接頭清除曲線對淬滅劑性質的有趣依賴性，其中L-半胱氨酸最有效。

洗濾過程的效率可以通過充分去除先前的緩沖液成分并將產(chǎn)品交換為目標緩沖液成分所需的次體積數(shù)量（DV，洗濾緩沖液與產(chǎn)品體積的相對體積）來量化。mAb工藝的典型范圍為6至10個DV，理論緩沖液置換率達到99.75%或更高。對于ADC工藝，預計UF/DF步驟可能需要更多的DV，以確保已知和假定的細胞毒性小分子雜質降低到可接受的水平，尤其是在濾膜上分配不理想的情況下。

2018年發(fā)表的一份關于ADC中小分子雜質控制策略的文件。這些文獻概述了一套原則，通過這些原則，可以證明在為藥物接頭中間體設定規(guī)格時的靈活性是合理的，特別是在定義高于現(xiàn)有新原料藥和產(chǎn)品監(jiān)管指南規(guī)定的小分子雜質限值方面。本文中的關鍵假設之一是，在隨后的UF/DF偶聯(lián)后純化過程中，不與mAb偶聯(lián)的小分子雜質被有效去除至低于任何關注水平。在許多情況下，情況確實如此，因為我們之前調查的數(shù)據(jù)表明，大多數(shù)公司在純化后能夠將ADC DS中的小分子雜質水平降低到0.1%以下（基于重量/重量）。然而，確實出現(xiàn)了上面討論的例子，這表明雜質清除可能更復雜，需要額外的考慮。

當偶聯(lián)后存在的雜質類型和水平可能高度可變時，定義雜質去除的“效率”是一個挑戰(zhàn)。盡管如此，能夠根據(jù)去除的難易程度對雜質進行分類，對于加速設計有效的純化策略具有價值，有助于在工藝和控制策略開發(fā)過程中集中精力。本文的一個具體目標是應用收集的信息來評估不可偶聯(lián)的小分子雜質確實可以被UF/DF有效清除的假設。本文還試圖通過更廣泛地了解工業(yè)公司如何使用UF/DF進行偶聯(lián)后純化的技術方面來填補當前文獻中的空白，并為有效去除雜質提供實用建議。

【NO.2】調查結果和討論

2.1 范圍和方法

向IQ聯(lián)盟的成員公司（尤其是具有ADC經(jīng)驗的公司）發(fā)送了一份調查，其中包含12個問題，涵蓋五大類：雜質分類和去除難易程度、UF/DF作參數(shù)和平臺方法、分析分析和產(chǎn)品質量屬性（PQA）、生產(chǎn)規(guī)模的挑戰(zhàn)和新興技術。重點是用于腫瘤適應癥（特別是ICHS9范圍內的適應癥）和小分子藥物有效載荷的ADC的偶聯(lián)后純化。

ADC承載的更大的寡核苷酸或肽/蛋白等有效載荷為純化帶來了額外的挑戰(zhàn)，但不在本文的討論范圍之內。

2.2 使用UF/DF進行雜質分類和易于清除

為了探究UF/DF在后偶聯(lián)過程中去除不同類別雜質的效率，調查中的三個問題要求受訪公司：

（1）選擇他們認為最難去除的三種雜質類型;

（2）說明單獨使用UF/DF是否可以充分去除這些雜質，或者通常需要額外的純化步驟（例如層析）;

（3）強調公司為改善這些雜質去除而實施的任何優(yōu)化方法。“最具挑戰(zhàn)性”和“充分移除”是主觀術語；因此，結果會受到公司個人經(jīng)驗的影響。

盡管如此，綜合數(shù)據(jù)提供了有用的視角和背景。表2總結了前兩個問題的結果，第三個問題的回答包含在下面的討論中。

表2.受訪者對UF/DF后偶聯(lián)過程中去除不同類型雜質的相對難度的評估

溶劑和反離子被評為最容易去除雜質，其次是小分子試劑和副產(chǎn)品。UF/DF通常能夠將這些材料清除至低水平，而幾乎不需要優(yōu)化參數(shù)（例如，僅修改緩沖液追蹤步驟以提高產(chǎn)量）。在一項關于mAb抗原結合片段的UF/DF研究中，檸檬酸根離子的清除率降低（由于與產(chǎn)物蛋白的特異性相互作用），但調查受訪者并未強調這是ADC加工中對反離子的關注點。溶劑（例如二甲基亞砜（DMSO）或乙二醇）和殘留的小分子試劑（尤其是那些水溶性更強的試劑，例如三（2-羧乙基）膦或脫氫抗壞血酸）預計會在最初的幾個DV中降低到低水平。請注意，粗ADC輸入中的雜質含量較高，和/或所得純化材料中的限值更嚴格，會增加UF/DF純化的負擔。可以實施延長運行時間、多緩沖液交換或增加DV等策略，以確保滿足下限。

大多數(shù)受訪者認為未偶聯(lián)（“游離”）藥物接頭和結構相關雜質更具挑戰(zhàn)性。當未偶聯(lián)的藥物接頭難以去除時，有人認為這是由于藥物接頭與ADC和/或UF/DF膜之間的低親和力、非共價相互作用。平臺UF/DF可能足夠，也可能不夠，可能需要根據(jù)具體情況進行單元操作開發(fā)。公司引用的此類開發(fā)示例包括以下一項或多項：緩沖液成分、pH值、上樣量預處理、膜組成、膜孔徑（MWCO）和作參數(shù)的優(yōu)化。更重要的修改包括使用有機助溶劑，甚至設計了多步UF/DF作。如果僅通過UF/DF無法去除結構相關的雜質，公司通常會在運行UF/DF進行最終緩沖液置換之前，先實施層析步驟進行純化。

藥物抗體比（DAR）變體、偶聯(lián)分子變體（例如，不含細胞毒素或僅附著一部分細胞毒素的mAb接頭）、產(chǎn)品相關聚集體和內毒素可歸類為“大分子”雜質。這些被確定為最具挑戰(zhàn)性的雜質類別，因為與小分子雜質相比，它們在結構和/或大小上與目標ADC產(chǎn)物更相似。實際上，UF/DF的分離分離度較差，因此無法用于去除這些類型的雜質。不同的色譜模式，如體積排阻（SEC）、疏水相互作用（HIC）和離子交換（IEX），被認為是可能的緩解策略。這些類型的色譜分離通常用于去除mAb工藝中與產(chǎn)品相關的雜質。總體而言，這些結果與迄今為止文獻報道的結果大致一致。

已經(jīng)建立了多種分析技術來鑒定ADC中的雜質并定量其含量。鑒于潛在ADC和雜質結構的多樣性，選擇合適的分析方法評估UF/DF期間的雜質去除需要根據(jù)具體情況進行。

2.3 UF/DF操作參數(shù)和平臺方法

本文試圖更深入地了解運行UF/DF 在ADC與mAb之間的操作差異。幾乎所有受訪者都在開發(fā)領域實施了mAb UF/DF的平臺方法，利用成熟的方法，對每個分子進行少量調整。平臺技術的優(yōu)勢包括簡化流程和分析開發(fā)時間表、提高運營效率以及簡化供應鏈。然而，對于ADC，大多數(shù)公司表示他們目前沒有為UF/DF使用標準化平臺，盡管這樣做是可行的未來狀態(tài)。

圖2.導致當前缺乏ADC中UF/DF處理的一般平臺方法的因素概述

圖2根據(jù)調查回復和WG作者的經(jīng)驗，突出顯示了為ADC運行更多定制UF/DF的潛在原因。在回答這個問題的10家公司中，最常見的調查回復是需要根據(jù)具體情況使用不同的方法來最有效地去除特定雜質。設施擬合問題（例如，作規(guī)模、電位化合物處理）被一半的受訪者引用。變量產(chǎn)品穩(wěn)定性也是一個問題，包括它與DAR值的關系：在一家公司提供的示例中，與較低的DAR（～4）ADC相比，觀察到較高的DAR（～8）ADC的聚合傾向增加。對于一些公司來說，在其整體管線中擁有ADC包含少量項目意味著沒有必要建立標準化方法所需的前期投資。有限的ADCs整體經(jīng)驗也被提及為一個因素。隨著ADC在整個行業(yè)中越來越普遍，看看是否有更多公司采用平臺式UF/DF方法將會很有趣。

還收集了數(shù)據(jù)以典型臨床需求規(guī)模下，對比ADC 和mAb的UF/DF處理的典型實驗參數(shù)。結果如表3所示，存在幾個共同點，錯流速率、跨膜壓力和膜孔徑的范圍通常以mAb和ADCs的形式相似。

表3：ADC和mAb之間UF/DF關鍵工藝參數(shù)對比

大多數(shù)受訪者使用兩種模式的再生纖維素膜，其中聚醚砜（PES）是ADC的第二選擇。

確實出現(xiàn)了一些差異。ADC的膜載樣量和產(chǎn)物濃度略低于典型mAb。目前尚不清楚這是由于較高膜載樣量下的特殊挑戰(zhàn)，還是ADC批次大小小于mAb。ADC的膜面積要求和操作體積（生物反應器、TFF再循環(huán)罐和總最終池）處于mAb通常范圍的下限。ADC工藝通常需要更多的DV。事實上，超過一半的受訪公司表示，超過10個DV用于ADC工藝。雖然膜壽命是mAb加工的常見考慮因素，但大多數(shù)受訪者將ADC UF/DF膜視為一次性使用。調查中沒有詢問這方面的驅動因素。然而，與高效材料一起使用的清潔膜的交叉污染風險、成本、時間、驗證活動和復雜性可能會超過從重復使用中獲得的任何經(jīng)濟利益。就UF/DF膜形式而言，目前mAb和ADC工藝中最常見的是平板膜包，它需要一個支架。或者，高度適用于強效化合物的新型配置正在變得容易獲得，包括最近推出的Pellicon即插即用無支架膠囊。在選擇合適的膜時，有機溶劑耐受性和不同膜成分的化學相容性也是關鍵考慮因素。

2.4 分析檢測和產(chǎn)品質量屬性

據(jù)報道，在UF/DF期間使用了一系列分析分析（表4）。最普遍的是pH/電導率和雜質清除率（包括游離藥物和藥物接頭）。通常還測量飼料和產(chǎn)品溶液的濃度，以及游離藥物/藥物接頭的濃度。報告的平均分析數(shù)量為2次，但公司之間在這些技術及其使用方式上存在差異（例如，作為生產(chǎn)過程中決策的過程控制，或僅作為開發(fā)的一部分監(jiān)控知識構建）。例如，一些公司在整個UF/DF作過程中使用全面的pH值和電導率控制，而另一些公司則只測量這些來控制以確定步驟的終點。同樣，關于濃度測量（特別是游離藥物和藥物接頭）是用作制造對照還是僅用于信息，也存在分歧。在ADC和標準mAb工藝之間發(fā)現(xiàn)了相似的分析方法開發(fā)工作流程（即在實驗室規(guī)模開發(fā)和大規(guī)模驗證中）。最終，將根據(jù)具體情況確定為不同雜質提供足夠靈敏度和特異性的適當分析工具。雖然調查中沒有詢問，但原位分析也可能很普遍，并且由于UF/DF ADC作的效力，因此在UF/DF ADC作中首選。例如，UF/DF模塊中的滲透流中存在UV在線傳感器是很常見的。紫外在線傳感器的不同波長可以與不同的小分子雜質相關聯(lián)，以跟蹤清除率，從而有助于減少樣品作和人為暴露。

表4.ADC UF/D操作中最常用的分析檢測

要求公司在描述ADC UF/DF過程時，通過要求他們從表5所示的列表中選擇“前三個”最重要的屬性，深入了解他們認為的關鍵產(chǎn)品質量屬性（PQA）。聚集體水平（主要是可溶性物種）和游離藥物相關物種脫穎而出，幾乎是一致的選擇。其他小分子雜質的殘留水平以及ADC DAR也被許多公司評為重要水平。

表5.在UF/DF工藝開發(fā)過程中評估的ADC產(chǎn)品質量屬性的相對優(yōu)先級

公司之間在用于ADC UF/DF工藝表征的實驗方法上存在高度一致性。大多數(shù)受訪者（83%，12人中有10人）贊成多因素實驗設計（DoE）研究用于評估產(chǎn)品質量和工藝性能的作參數(shù)。只有一家公司首選單變量、一次一個因子（OFAT）方法。大多數(shù)（也是83%）公司也經(jīng)常采用小分子雜質的加標研究，這是對ADC區(qū)別于mAb開發(fā)的一個考慮因素。正如工作組的上一篇文章所討論的，10項命運與清除研究可以成為支持ADC小分子雜質控制策略的科學論證的寶貴工具，通過提供實驗數(shù)據(jù)來證實（或反駁）對UF/DF去除雜質有效性的紙質評估。四分之一的受訪者（25%）表示，他們在ADC UF/DF工藝表征期間進行了膜再利用研究，這與上述早期結果一致，表明膜再利用在臨床供應領域并不常見，

【NO.3】生產(chǎn)規(guī)模的挑戰(zhàn)

該調查詢問了公司在生產(chǎn)規(guī)模上運行ADC UF/DF時遇到的最大挑戰(zhàn)是什么，結果如表6所示。與前面圖2中描述的結果進行比較，該結果側重于初始工藝開發(fā)的挑戰(zhàn)，具有指導意義。在早期領域，公司可能正在研究多種不同的ADC，每種ADC都有自己的偶聯(lián)和純化方法，但不太成熟。因此，可變雜質分布或產(chǎn)品穩(wěn)定性問題等挑戰(zhàn)更為常見。當達到制造規(guī)模時，重點通常在單個ADC上，其特性更容易理解，其過程也更穩(wěn)健。如表6所示，在現(xiàn)階段，更普遍的挑戰(zhàn)與設施、設備和秤之間技術轉讓的實際考慮有關。一家公司強調，消耗品和其他材料的可用性是一個值得關注的問題，這可能是由于最近的全球供應鏈問題。

表6.報告了在生產(chǎn)規(guī)模下為ADC運行UF/DF時面臨的挑戰(zhàn)

【NO.4】新興技術

我們預計新技術的應用將進一步提高ADC純化方法的效率和實用性。大多數(shù)公司表示對應用高級分析工具（表7）感興趣，例如過程分析技術（PAT），用于實時測量濃度、特定雜質水平和其他屬性。一些PAT工具已應用于UF/DF加工中用于單克隆抗體。例如，在線傅里葉變換紅外（FTIR）光譜傳感器已被證明可用于實時監(jiān)測UF/DF中的產(chǎn)品質量屬性。因此，可以設想擴展到ADC。

表7.未來可能越來越多地用于ADC純化的新技術總結

此外，預計UF/DF替代純化技術的未來發(fā)展，包括制備色譜（HIC、IEX和SEC）和膜吸附劑。膜層析是填料柱層析的強大天然/補充，用于生物分子的純化，迄今為止已30次用于ADC。但已看到有限同樣，使用活性炭或其他吸附劑去除小分子雜質是小分子原料藥合成中的常規(guī)做法。據(jù)報道，在發(fā)現(xiàn)領域新型ADC的小規(guī)模合成中，用活性炭處理偶聯(lián)后混合物以去除多余的藥物接頭。Hunter及其同事進行的一項模型研究評估了結合洗脫色譜法從單克隆抗體中分離小分子的三種替代方案（兩級滲濾、流通色譜和碳過濾），結果使這些研究人員得出結論：“當面臨類似挑戰(zhàn)時，我們建議首先測試活性炭過濾”。然而，據(jù)我們所知，尚未在更大規(guī)模的ADC生產(chǎn)中報告這種情況。

雖然增加層析步驟可以有效去除麻煩的雜質，但會增加整個過程的成本和復雜性。幾家公司對可能提高UF/DF本身能力的新興技術表示了興趣。其中包括采用一次性技術和設備，包括單通道切向流過濾和在線滲濾作。

在偶聯(lián)后必須去除雜質的另一種方法是首先避免它們的形成。越來越多地使用更多的位點選擇性（或位點特異性）偶聯(lián)方法（例如，使用工程化到mAb中的非天然氨基酸的生物正交點擊化學）將在這里產(chǎn)生工藝和分析優(yōu)勢，一家公司將其稱為未來的機會。請注意，雖然位點特異性偶聯(lián)會產(chǎn)生更均勻的ADC產(chǎn)物，但仍需要實施偶聯(lián)后純化（例如，通過UF/DF）以去除偶聯(lián)過程中引入的小分子雜質和副產(chǎn)物（例如，過量的藥物接頭、試劑）。

【NO.5】建議

基于對調查結果的分析和作者的觀點，本文提供了一些使用UF/DF去除ADC偶聯(lián)后雜質的實用建議。其目的不是提供詳盡的細節(jié)，而是概述一些建議的最佳實踐。希望這對可能剛進入該領域并首次開發(fā)ADC純化的從業(yè)者提供有用的指導。

在此建議這還可以通過努力實現(xiàn)“平臺”方法來幫助標準化關鍵參數(shù)的操作范圍，從而幫助縮短工藝開發(fā)時間，特別是對于對速度需求至關重要的人體1期臨床試驗。圖3簡要總結了當前UF/DF技術去除ADC加工中常見的不同類別雜質的能力。

圖3.根據(jù)雜質各自的UF/DF去除難度和任何所需的緩解策略對雜質進行定性排序

如上所述，溶劑、反離子和小分子試劑通常可以單獨通過UF/DF去除，只需進行極少的參數(shù)修改。

對于小分子雜質，雜質是否含有藥物（即未偶聯(lián)的“游離”藥物接頭）等因素會影響其去除。藥物接頭更難去除的情況可能是由于ADCDS的特性以及藥物接頭與其的非特異性相互作用。根據(jù)經(jīng)驗，在這種情況下，優(yōu)化UF/DF作參數(shù)（例如錯流速率或跨膜壓力）通常是無效的；更有用的補救措施可能是修改緩沖液（例如pH值和/或離子強度）以破壞非特異性相互作用。通過適當?shù)墓曹椃磻銣鐒└淖冞@些雜質的物理化學性質也可能是有益的。了解雜質的結構、性質和下游歸宿將有助于工藝和控制策略的開發(fā)。藥物接頭中可與mAb反應的雜質會產(chǎn)生無法通過UF/DF去除的偶聯(lián)雜質（由于它們的結構與所需的ADC結構相似，因此很可能也無法通過偶聯(lián)后色譜去除），而不可偶聯(lián)的雜質將更容易清除。從藥物接頭中攜帶的最有問題的雜質可能需要采用不同的偶聯(lián)后純化方法。優(yōu)先可以通過明智地設計和優(yōu)化合成路線，在藥物接頭階段將這些雜質控制到適當?shù)牡退剑ɑ蛲耆G2018年立場文件中的原則可用于定義藥物接頭中“適當?shù)汀彼降碾s質構成，并在規(guī)格設定中實現(xiàn)一定程度的科學合理性。

大分子雜質（例如>3000Da），例如ADC聚集體和不需要的DAR變體，無法通過UF/DF清除，需要其他純化方法。已經(jīng)為ADC建立了多種制備柱色譜方法，但建議研究可能更高效、更省時的新型技術。大分子雜質的過程控制也很重要，至少，目標應該是在UF/DF期間其水平不會顯著增加。

雖然對ADC階段規(guī)格設置的詳細討論超出了本文的范圍，但所需的雜質清除率水平可能會因其分類而異以及它們對產(chǎn)品質量、安全性和有效性構成的風險。總體控制策略應隨著項目從開發(fā)到商業(yè)化而分階段發(fā)展。

方案2強調了開發(fā)UF/DF工藝時需要考慮的幾個關鍵因素（剪切敏感性、濃度因子、溶液粘度和滲濾效應），并概述了解決ADC每個因素的逐步方法。

方案2.幫助提高UF/DF運營績效的決策樹

許多公司在調查中提到，在開發(fā)ADC制造工藝方面相對缺乏經(jīng)驗（至少與mAb相比），這是UF/DF所遇到挑戰(zhàn)的一個復合因素。也缺乏詳細介紹UF/DF在這種模式下的大規(guī)模實際應用的文獻。因此，鼓勵通過文獻和會議記錄交流更多的案例研究、故障排除技巧和經(jīng)驗教訓。更廣泛的知識共享將有助于推動該領域的發(fā)展。

【NO.6】結論

UF/DF的使用是ADC生產(chǎn)中共軛后操作的關鍵，對整體雜質控制策略至關重要。本文基于行業(yè)基準調查數(shù)據(jù)，對UF/DF在ADC偶聯(lián)后純化中的應用進行了全面分析。涵蓋的主題包括雜質分類、ADC作參數(shù)的潛在標準化、關鍵分析分析、大規(guī)模挑戰(zhàn)和新興技術。還提供了作者對當前狀況的看法和前瞻性建議。希望本文能為UF/DF在ADC工藝中的應用提供有用的見解，并有助于開啟未來的對話以繼續(xù)擴大該領域。

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