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NGS技術憑借獨特優勢，成為解析PI3K通路基因變異及伴隨分子事件的關鍵

激素受體陽性/HER2陰性（HR+/HER2?）轉移性乳腺癌（MBC）的分子異質性顯著影響其臨床診療策略。其中，磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）通路相關基因（如PIK3CA、AKT1及PTEN）的變異是驅動該亞型腫瘤發生、進展及耐藥的核心機制，且檢測結果能夠直接影響患者靶向治療選擇。二代測序（NGS）技術憑借其高通量、多基因同步檢測的優勢，成為解析PI3K通路變異及伴隨分子事件（如ESR1突變、BRCA1/2缺失）的關鍵工具。2025年5月25-27日， 第33屆歐洲胸外科醫師協會（ESTS）年會于 匈牙利隆重召開 。在本屆年會上，KEYNOTE-671研究 針對Ⅱ 期 患者 的第三次中期分析（IA3）結果披露。作為目前唯一在NSCLC圍手術期治療中同時取得 無事件生存期（ EFS ） 和 總生存期（ OS ） 雙 終陽性 結果的Ⅲ期臨床研究，其最新進展無疑將為NSCLC 的 治療帶來重要啟示與實踐價值。

目前，歐洲腫瘤內科學會（ESMO）已明確推薦NGS作為HR+/HER2?MBC患者的標準診斷方案，其臨床價值不僅體現在治療靶點的精準篩選，更在于通過多維分子圖譜揭示腫瘤進化軌跡與耐藥機制。然而，現有研究多聚焦于PIK3CA熱點突變，對PTEN變異（包括缺失、移碼突變等）的分子特征及其臨床意義尚缺乏系統性解析。針對這一挑戰，近期發表在Critical Reviews in Oncology/Hematology雜志的一篇綜述文章基于NGS技術平臺探討了HR+/HER2?MBC中PI3K通路基因變異特別是PTEN變異的檢測現狀，以期為NGS作為該亞型患者的精準分子檢測選擇提供新的臨床證據[1]。

圖1 研究標題

聚焦PTEN變異檢測：傳統檢測方法的臨床局限性與NGS檢測的獨特優勢

PI3K信號通路的失調與腫瘤發生和進展顯著相關，約50%的HR+/HER2?MBC患者存在該通路異常，其中PIK3CA突變最為常見（約40%），AKT1突變占5%，PTEN功能缺失性變異占5%。目前，已有多種針對PI3K通路的靶向治療藥物獲得美國食品藥品監督管理局（FDA）和歐洲藥品管理局（EMA）批準用于MBC治療。因此，精準檢測PI3K通路變異已成為MBC個體化診療的關鍵環節之一。在PI3K通路中，PTEN狀態的評估面臨獨特挑戰，因其變異類型可涉及DNA、RNA及蛋白水平的復雜改變，這種復雜性疊加其他可干預生物標志物（如ESR1、BRCA）的分子譜分析需求，使得通路整體評估更為困難。

圖1 PI3K/Akt/mTOR信號通路的示意圖，包括已批準藥物及其靶點

>>>>IHC：PTEN分析的實用之選，但局限不容忽視

IHC是一種普及度高且成本效益相對較高的技術，理論上可作為PTEN分析的實用選擇。IHC能夠直觀確認PTEN蛋白在腫瘤區域內的表達水平及分布特征，使病理學家得以對蛋白進行半定量定位分析。然而，IHC評分結果易受腫瘤內異質性影響，不同腫瘤區域的蛋白表達差異可能導致結果顯著波動，取材部位不同可能產生結果偏差。此外，IHC檢測流程及判讀缺乏標準（如抗體選擇、染色條件及評分體系），降低了結果的可重復性與診斷可靠性。

此外，IHC的另一核心局限性在于其無法關聯蛋白表達水平與功能活性。例如，非編碼區突變、剪接變異體或翻譯后修飾（如磷酸化異常）可能破壞PTEN功能，但此類改變不會顯著影響IHC檢測的蛋白豐度，導致假陰性結果。同樣，IHC無法區分功能性與非功能性PTEN蛋白，而后者對下游PI3K/AKT通路活性的調控具有決定性意義。這些缺陷嚴重限制了IHC在需基于PTEN功能狀態指導治療決策場景中的應用價值。

>>>>PCR：適合PTEN點突變檢測，但缺乏分析潛力

PCR技術通過靶向已知基因區域（如外顯子及熱點突變位點），可高特異性地檢測PTEN點突變、小片段插入/缺失等變異，其靈敏度與精確性在單基因檢測中表現突出。然而，PCR的檢測范圍局限于預設的基因片段，無法識別結構重排（如大片段缺失/倒位）、拷貝數變異或表觀遺傳沉默等復雜變異類型，而這些改變是PTEN功能失活的重要機制。

此外，另一關鍵限制在于PCR缺乏功能或背景分析能力。例如，PCR雖可鑒定PTEN基因突變，但無法判斷該變異是否導致蛋白功能喪失或影響PI3K/AKT通路活性。在HR+/HER2?乳腺癌等需綜合多基因變異進行精準分型的場景中，PCR的單一基因檢測模式無法提供PTEN通路全局狀態的關鍵信息，難以滿足臨床需求。

>>>>NGS：全面解析PTEN改變的多維度工具

NGS技術能夠對PTEN變異（包括單核苷酸變異、拷貝數變異、結構重排及表觀遺傳改變等）進行多維綜合分析。與PCR（僅能檢測預設區域）或IHC（僅評估蛋白表達而無法揭示遺傳學改變）相比，NGS通過標準化指南提供PTEN狀態的全面評估，克服了輔助檢測方法的局限性（如IHC的觀察者間變異性及存檔樣本中蛋白降解導致的假陰性）。同樣，基于PCR的檢測雖特異性高，但無法識別基因缺失或表觀遺傳沉默，而這些變異對MBC的PTEN檢測至關重要。此外，NGS還可同步評估其他可干預基因（如PIK3CA、AKT1、BRCA、HER2及ESR1）的變異，提供更精細的分子特征。此外，盡管NGS與液體活檢技術的結合進一步拓展了其臨床應用潛力，但PTEN缺失的液體活檢檢測仍面臨技術挑戰與爭議。

誠然，NGS檢測成本高昂，且高度依賴實驗室基礎設施、生物信息學分析能力及大量資金投入。同時，其數據解讀的復雜性尤為突出，例如需區分致病性突變與意義未明的變異。此外，NGS結果的回報周期通常長于PCR或IHC，可能延遲治療決策的制定。然而，隨著HR+/HER2?MBC中全面分子分型檢測需求的提升，NGS作為標準診斷工具的臨床價值愈來愈獲得臨床廣泛認可。

結論：NGS是HR+/HER2?MBC分子檢測的首選方法

PI3K通路靶向藥物在HR+/HER2?MBC中的療效凸顯了精準評估該通路分子狀態的重要性，尤其是篩選可能從AKT1抑制治療中獲益的患者群體。盡管IHC和PCR已被廣泛應用于實體瘤中PTEN變異的檢測，但兩者在全面評估HR+/HER2? MBC患者PTEN狀態時均存在顯著局限性。

NGS技術通過多維檢測能力（包括單核苷酸變異、拷貝數變異、結構重排及表觀遺傳改變）可系統解析PTEN基因的完整變異譜，同時提供腫瘤生物學特征的深度洞見，從而克服傳統方法的不足。然而，NGS的臨床應用需依托標準化的質量控制流程與指南規范，以確保檢測結果的精確性與可重復性。在尚未建立統一標準的醫療場景中，構建區域性技術協作網絡以支持NGS的可持續實施（尤其是全基因組譜分析）將成為推動精準診療的關鍵舉措。

參考文獻：

[1]Fusco N, Malapelle U. Next-generation sequencing for PTEN testing in HR+/HER2- metastatic breast cancer. Crit Rev Oncol Hematol. 2025;207:104626.

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審批編號：CN-60053 過期日期：2025-11-19

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